1试剂和仪器
1.1仪器
L-7000型液相色谱仪(日本日立公司) ,配二极管阵列检测器
1.2试剂
甲醇(HPLC级)β-苯乙醇标准
1.3色谱条件
色 谱 柱:ultimateXB-C18柱(4.6×250mm,5μm,120) ;柱温:25°C;检测波长:210nm;流 动 相:甲 醇+水=55+45;流 速: 1.0ml/min;进样体积:20μl。
1.4实验步骤
1.4.1标准溶液的配制
准确称取β-苯乙醇标准25mg,以流动相(甲醇+水=55+45)溶解,定容至25ml容量瓶中,此溶液为1.0mg/ml标准储备液。临用前用流动相稀释。
1.4.2标准曲线的绘制
用流动相稀释标准储备液成0.5μg/ml、1.0μg/ml、5.0μg/ml、10ml、50μg/ml标准系列,参照色谱条件,将色谱仪调至*状态,进样20μl,绘制标准曲线。
1.4.3样品处理准确移取10ml米酒样品于50ml容量瓶中,用流动相定容,摇匀,经0.45μm滤膜过滤,进样20μl。
2结果与讨论
2.1流动相条件的选择
本文比较了甲醇与水的不同流动相比例(甲 醇+水=55+45;甲醇+水=50+50;甲醇+水=60+40)条件下的实验效果,在其他色谱条件不变的情况下,当甲醇与水的流动相比例为55∶45时,样品中的被测物峰能与溶剂峰、杂质峰达到有效分离,且峰形对称性好,因此,本实验选用甲醇+水=55+45作为流动相。
2.2检测波长的选择
本实验利用二极管阵列检测器对β-苯乙醇在190nm~300nm之间进行波长扫描,β-苯乙醇在210nm处有zui大吸收波长,考虑到本实验采用甲醇作为溶剂定容处理样品,甲醇的紫外吸收波长在190nm~200nm,对本实验干扰小,故选用有较强吸收的210nm作为本方法的检测波长。
2.3标准曲线、检测限
以β-苯乙醇浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,线 性 回 归 方 程 为Y=57008X+1823,相 关系 数r为0.9999,表明在0.5μg/ml~50μg/ml范围内呈良好线性关系。以3倍噪声信号比计算zui低检出浓度为0.02μg/ml。
2.4准确度和精密度试验
在米酒样品中分别加入1.0μg/ml、5.0μg/ml、25.0μg/ml低、中、高三个浓度的β-苯乙醇标准溶液,按上述实验条件分别进行6次测定,测定结果见表1。
、
2.5样品测定
使用本方法对市场销售米酒进行测定,其中样品色谱图见图3,样品加标色谱图见图4。
3结果
本文建立了运用液相色谱测定米酒中β-苯乙醇的方法,流动相为 甲 醇+水(55+45) ;色 谱 柱为ultimateXB-C18柱(4.6×250mm,5μm,120) ;柱 温:25°C;流 速1ml/min,zui适吸收波长210nm。此方法具有处理简单、快速、定量准确、回收率高和重复性好的特点,能够满足样品检测需要。